四环素

疾速检测试剂盒阐明书

一、原理

本试剂盒接纳直接竞争ELISA办法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物四环素将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗四环素抗体，参加酶标志物后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物四环素的含量成负相干，与尺度曲线比力即可得出响应残留物四环素的含量。

二、试剂盒特征

• 试剂盒敏捷度：  0.5ppb
• 孵育温度：      25℃
• 孵育工夫：      30min～15min
• 样本检测上限

猪肉、猪肝、鸡肉样本：

四环素                         10ppb

二甲an四环素                    15ppb

吡四环素                        15ppb

金霉素                           20ppb

脱甲基金霉素                      25ppb

土霉素                          35ppb

强力霉素                          40ppb

• 交织反响率

四环素                         100%

二甲an四环素                        85%

吡四环素                         70%

金霉素                         50%

脱甲基金霉素                       42%

土霉素                         30%

强力霉素                      25%

• 样本接纳率

鸡肉、猪肉、猪肝                   70%-120%

三、试剂盒构成

四、所用仪器、试剂

具有的仪器：酶标仪、均质器、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）、恒温箱

微量移液器：单道 20～200µl、单道100～1000µl、多道 30～300 µl

试      剂：浓盐酸、氢氧化钠

五、样本前处置步调

• 样本处置前须知

（a）实行中必需利用一次性吸头，汲取差别试剂时要改换吸头。

（b）实行之前须反省种种实行用具能否洁净，须要时可对实行用具举行干净，以制止净化搅扰实行后果。

• 样本前处置需配制：

配液 1：0.2M 盐酸

取 17.2ml 浓盐酸加去离子水定容至 1L

配液 2：1 M 氢氧化钠

称 4g 氢氧化钠固体加去离子水定容至100ml

配液 3   样本提取液

将20X 稀释提取液与去离子水 1:19 浓缩后用

• 构造样本的处置办法

1、称 2±0.05g 均质后的构造至50ml离心管中，参加3ml 0.2M盐酸（见配液1），充实振荡3min；

2、再参加600µl 1M 氢氧化钠（见配液2）溶液和2.4ml样本提取液（见配液3）溶液，充实振荡3min，室温4000r/min 以上离心 5min；

3、取50µl下层液举行剖析。  

样本浓缩倍数：4                           

六、 酶标免疫剖析步伐:

• 测定前应须知：

1、利用前将需用试剂和板条的温度上升至室温（20～25℃）。

2、利用之后立刻将一切试剂放回2～8℃。

3、在ELISA剖析中的再现性，很大水平上取决于洗板的*性，准确的洗板操纵是ELISA测定步伐中的要点。

4、一切恒温孵育历程，制止光芒照射，用盖板膜挡住微孔板。

• 操纵步调：

• 从2～8℃冷藏情况中取出所需试剂，室温（20～25℃）均衡30min以上，留意每种液体试剂利用前均须摇匀。

2、 配制尺度品

尺度品6（40.5ppb）：

50µl 20X尺度品（810ppb）用 950µl 尺度品复溶液浓缩；

尺度品5（13.5ppb）：

600µl 尺度品复溶液与 300µl 尺度品 6 混淆；

尺度品4（4.5ppb）：

600µl 尺度品复溶液与 300µl 尺度品 5 混淆；

尺度品3（1.5ppb）：

600µl 尺度品复溶液与 300µl 尺度品 4 混淆；

尺度品2（0.5ppb）：

   600µl 尺度品复溶液与 300µl 尺度品 3 混淆；

尺度品1（0ppb）：

间接利用尺度品复溶液                                     

• 取出框架及必要数目的微孔，将不必的微孔放入自封袋，保管于2-8℃。
• 配液：将15ml稀释洗濯液（20倍稀释）用去离子水依照1：19浓缩（1份稀释洗濯液+19份去离子水），或按所需用量配制洗濯液。
• 编号：将样本和尺度品对应微孔顺次编号，每个样本和尺度品做2孔平行，并记载尺度孔和样本孔地点的地位。
• 加尺度品/样本50µl/孔到各自的微孔中，然后加参加酶标志物50µl/孔再参加抗体事情液50µl/孔，用盖板膜封板，悄悄振荡混匀。25℃情况中反响30min。
• 将孔内液体甩干，用已浓缩的洗濯液250µl/孔洗板4～5次，每次距离15～30秒，用吸水纸拍干（拍干后未扫除的气泡可用洁净的枪头刺破）。
• 显色：参加底物A液50µl/孔，再参加底物B液50µl/孔，悄悄振荡混匀，25℃情况中避灯光显示色15min。
• 测定：参加停止液50µl/孔，悄悄振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（发起用双波长450/630nm检测，5min内读数），测定每孔OD值。

七、后果判断

后果判断有两种办法，大略判断可用第1种办法，定量判断用第2种办法。留意样本吸光度值与其所含四环素量成负相干。

1、大略判断：

用样本的均匀吸光度值与尺度值比力即可得出其浓度范畴(ng/ml)。假定样本1的吸光度值为0.3，样本2的吸光度值为1.0，尺度液吸光度值辨别是：0ppb为2.243； 0.5ppb为1.816；1.5ppb为1.415；4.5ppb为0.74；13.5ppb为0.313；40.5ppb为0.155。则样本1的浓度范畴是13.5ppb～40.5ppb；样本2的浓度范畴是1.5ppb～4.5ppb，乘以其对应的浓缩倍数即为样本中四环素实践浓度。

2、定量剖析

（1）百分吸光率的盘算，尺度品或样本的百分吸光率即是尺度品或样本的吸光度值的均匀值（双孔）除以*个尺度（0尺度）的吸光度值，再乘以100%，即

B—尺度溶液或样本溶液的均匀吸光度值

B₀—0ng/ml尺度溶液的均匀吸光度值

（2）尺度曲线的绘制与盘算

以尺度品百分吸光率为纵坐标，以四环素尺度品浓度（ng/ml）的半对数为横坐标，绘制尺度曲线图。将样本的百分吸光率代入尺度曲线中，从尺度曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的浓缩倍数即为样本中四环素实践浓度。

若使用试剂盒专业剖析软件举行盘算，更便于少量样本的正确、疾速剖析。

八、 留意事变

• 室温低于25℃或试剂及标本未回到室温（20～25℃）会招致一切尺度的OD值偏低。
• 在洗板历程中假如呈现板孔枯燥的状况，则会陪同着尺度曲线不可线性，反复性欠好的征象。以是洗板拍干后应立刻举行下一步操纵。
• 混淆要匀称，不然会呈现反复性欠好的征象。
• 反响停止液为2M硫酸，制止打仗皮肤。
• 不要利用过了无效日期的试剂盒；浓缩或搀和利用会惹起敏捷度、OD值变革；不要互换利用差别批号的盒中试剂。
• 不必的微孔板放进自封袋重新密封；尺度物质和无色的发色剂对光敏感，因而要制止间接表露在光芒下。
• 显色液如有任何颜色标明蜕变，该当弃之。尺度品1的吸光度值小于0.5时，表现试剂大概蜕变。
• 该试剂盒zui佳反响温度为25℃，温渡过高或过低将招致检测吸光度值和敏捷度产生变革。

九、蕴藏条件和保质期

• 蕴藏条件：试剂盒于2-8℃保管，不要冷冻。
• 保 质 期：该产品无效期为1年，消费日期见包装盒。

提醒：酶标板真空包装袋如有漏气，酶标板仍旧正常无效，不影响实行后果，请担心利用。

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