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速来看看CCK-8试剂盒的操纵步调
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  CCK-8试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实行(ELISA).已知浓度的尺度品、未知浓度的样品参加微孔酶标板内举行检测。先将生物素标志的抗体同时温育。洗濯后,参加亲和素标志过的HRP。再颠末温育和洗濯,去除未联合的酶联合物,然后参加底物A、B,和酶联合物同时作用。发生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例干系。
  CCK-8试剂盒的操纵步调:
  1、配制琼脂糖EB凝胶,电泳以分散DNA片断。任何范例或品级的琼脂糖都可以利用。
  AG真人激烈的保举利用奇怪的TAE/TBE电泳缓冲液。不要反复利用电泳缓冲液,旧的电泳缓冲液PH会增长而低落DNA的接纳产量;
  2、电泳充足工夫后,在紫外灯下警惕地把所需的DNA的片断切上去。并只管即便去除多余的凝胶。
  留意:DNA在紫外灯下的曝光的工夫不要凌驾30秒,同时在紫外灯下操纵的时分肯定要戴掩护眼镜。
  3、称取空离心管的分量,切下带目标片断的凝胶装在1.5ml离心管中并称其分量,求出凝胶块的分量,类似地确定其体积。一样平常状况下,凝胶的密度为1g/ml,于是凝胶的体积与分量的干系可按上面换算:凝胶薄片的分量为0.2g则其体积为0.2ml;参加等倍凝胶体积的BindingBuffer,把混淆物置于55℃~65℃水浴中温浴7min至凝胶*消融,其间每隔2-3分钟混匀一次;
  紧张提示:在凝胶*消融之后,留意凝胶-BindingBuffer混淆物的pH值。假如其pH值大于8的话,DNA的产量将大大增加。察看混淆物的颜色,假如是橙色或白色,则要参加5μl浓度为5M,pH为5.2的醋酸钠,以调低其pH值。颠末这一调治,该混淆物的颜色将规复为正常的浅黄色。一样平常状况下,利用奇怪的电泳缓冲液,凝胶-Bindingbuffer混淆物的PH值的不会降低;
  4、转移700μl的DNA-琼脂糖溶液到一个HiBindTMDNA柱子,并把柱子装在一个洁净的2ml搜集管内,室温下,10,000×g离心1min,弃去液体。
  一个HiBindDNA柱子最多可包容700μl的溶液,假如DNA-琼脂糖混淆物的体积大于700μl,可先转移700μl溶液至柱子,离心完后,将余下的溶液持续加上柱子上。但每一个HiBindTM柱子最多可以联合25~30μgDNA。假如预期产量较大,则把样品辨别加到符合数量的柱中。
  5、将柱子重新套接纳集管中,加300μlBindingBuffer至HiBindDNA柱子中;室温下,10,000×g离心1分钟,去弃滤出液;这一步相称要害,不要疏忽此步。
  6、将柱子重新套接纳集管中,参加700μlSPWWashbuffer至HiBindDNA柱子中,室温下,10,000×g离心1分钟,去弃滤出液;注:SPWWashbuffer在利用前必需按瓶子标鉴要求用无水乙醇举行浓缩。
  7、将柱子重新套接纳集管中,反复参加700μlSPWWashbuffer至HiBindDNA柱子中,室温下,10,000×g离心1分钟,去弃滤出液;
  8、弃去液体,将空柱子重新套接纳集管中,10,000×g离心1min以甩干柱基质剩余的液体。
  这步可以去除柱子基质上剩余的乙醇,不要省略此步―――对失掉好的DNA产量是非常紧张的。
  9、把柱子装在一个洁净的1.5ml离心管上,参加30~50μl洗脱液或灭菌水上柱子膜上,10,000×g离心1分钟,离心管中的溶液便是纯化的DNA产品,保管于-20度。

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