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CCK-8试剂盒实行原理和操纵步调详解
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   CCK-8试剂盒实行原理和操纵步调详解
  Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒,是一种基于WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐),CCK-8试剂盒实用于细胞增殖和细胞毒性的疾速高敏捷度检测试剂盒。
  CCK-8试剂盒实行原理:
  WST-8属于MTT的晋级产品,在电子耦合试剂存在的状况下,可以被线粒体内的脱氢酶复原天生高度水溶性的橙黄色的甲臜产品(formazan)。颜色的深浅与细胞的增殖成反比,与细胞毒性成正比。利用酶标仪在450mM波优点测定OD值,直接反应活细胞数目。
  CCK-8试剂盒用处:
  CCK-8法使用十分普遍,如药物挑选、细胞增  殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏实验以及生物因子的活性检测等。
  CCK-8试剂盒用于药物挑选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏实验。那么用于细胞毒性测定的操纵步调是什么呢?
  办法/步调1:
  在96孔板中配制100μl 的细胞悬液。将培育板在培育箱预培育 24 小时 (在 37℃,5% CO2 的条件下)。
  办法/步调2:
  向培育板参加 10μl 差别浓度的待测物质。
  办法/步调3:
  将培育板在培育箱孵育一段得当的工夫 (比方: 6,12, 24 或 48 小时)。
  办法/步调4:
  向每孔参加 10μl CCK8 溶液(Engreen) (留意不要在孔中天生气泡,它们会影响 OD 值的读数)。
  办法/步调5:
  将培育板在培育箱内孵育 1-4 小时。
  办法/步调6:
  用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。
  办法/步调7:
  假如临时意外定OD值,计划当前测定的话,可以向每孔中参加10μl 0.1 M HCl溶液大概1%w/vSDS 溶液,并遮掩培育板避光保管在室温条件下。在24小时内吸光度不会产生变革。
  以上便是CCK-8试剂盒的相干利用阐明,以供参考!

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