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绵羊白细胞介素1β(IL-1β)ELISA检测试剂盒利用阐明书

提 供 商: 上海研谨生物科技有限公司 材料巨细:
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细致介绍

本试剂盒只能用于迷信研讨,不得用于医学诊断

绵羊Sheep)白细胞介素1β(IL-1β)

ELISA检测试剂盒

利用阐明书

检测原理

试剂盒接纳双抗体一步夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)。往事后包被白细胞介素1β(IL-1β)抗体的包被微孔中,顺次参加标本、尺度品、HRP标志的检测抗体,颠末温育并彻底洗濯。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终极的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素1β(IL-1β)呈正相干。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),盘算样品浓度。

样品搜集、处置及保管办法

1.  血清:利用不含热原和内毒素的试管,操纵历程中制止任何细胞安慰,搜集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞敏捷警惕地分散。

2.  血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  构造匀浆:将构造参加过量心理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保管:假如样本搜集后不实时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,制止重复冻融,在室温下冻结并确保样品匀称地充实冻结。

自备物品

1. 酶标仪(450nm)

2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

操纵留意事变

1.  试剂盒保管在2-8℃,利用前室温均衡20分钟。从冰箱取出的稀释洗濯液会有结晶,这属于正常征象,水浴加热使结晶完全消融后再利用。

2.  实行中不必的板条应立刻放回自封袋中,密封(高温枯燥)保管。

3.  浓度为0的S0号尺度品即可视为阴性比较大概空缺;依照阐明书操纵时样本曾经浓缩5倍,终极后果乘以5才是样本实践浓度

4.  严厉依照阐明书中标明的工夫、加液量及次序举行温育操纵。

5.  一切液体组分利用前充实摇匀。

试剂盒构成

称号

96孔设置装备摆设

48孔设置装备摆设

备注

微孔酶标板

12孔×8条

12孔×4条

尺度品

0.3mL*6管

0.3mL*6管

样本浓缩液

6mL

3mL

检测抗体-HRP

10mL

5mL

20×洗濯缓冲液

25mL

15mL

按阐明书举行浓缩

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

停止液

6mL

3mL

封板膜

2张

2张

阐明书

1份

1份

自封袋

1个

1个

注:尺度品(S0-S5)浓度顺次为:0、15、30、60、120、240 pg/mL

试剂的预备

 20×洗濯缓冲液的浓缩:蒸馏水按1:20浓缩,即1份的20×洗濯缓冲液加19份的蒸馏水。

洗板办法

1.  手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗濯液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,云云洗板5次。

2.  主动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

操纵步调

1.  从室温均衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置尺度品孔和样本孔,尺度品孔各加差别浓度的尺度品50μL;

3.  样本孔先加待测样本10μL,再加样本浓缩液40μL;空缺孔不加。

4.  除空缺孔外,尺度品孔和样本孔中每孔参加辣根过氧化物酶(HRP)标志的检测抗体100μL,用封板膜封住反响孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗濯液,静置1min,甩去洗濯液,吸水纸上拍干,云云反复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6.  每孔参加底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.  每孔参加停止液50μL,15min内,在450nm波优点测定各孔的OD值。

后果判别

 绘制尺度曲线:在Excel事情表中,以尺度品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出尺度品线性回归曲线,按曲线方程盘算百般本浓度值。

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试剂盒功能

1.  正确性:尺度品线性回归与预期浓度相干系数R值,大于即是0.9900。

2.  敏捷度:最DI检测浓度小于1.0 pg/mL

3.  特异性:不与别的可溶性布局相似物交织反响。

4.  反复性:板内、板间变异系数均小于15%。

5.  贮藏:2-8℃,避光防潮保管。

6.  无效期:6个月

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