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纤维素(CLL)含量试剂盒阐明书
点击次数:125 公布工夫:2022-11-21

纤维素(CLL)含量试剂盒阐明书

                         可见分光光度法

留意: 正式测定之前选择 2-3 个预期差别大的样本做展望定。

规格50T/48S

正式测定前取2-3个预期差别较大的样本做展望定

测定意义:

纤维素是由葡萄糖构成的大分子多糖,通常与半纤维素、果胶和木质素联合在一同,是动物细胞

壁的次要布局身分。纤维素是一种紧张的膳食纤维,是天然界中散布最广、含量最多的 一种多糖。

测定原理:

纤维素为β -葡萄糖残基构成的多糖,在酸性条件下加热能剖析成β -葡萄糖。β -葡萄糖在强酸作 用下,可脱水天生β -糠醛类化合物。β -糠醛类化合物与蒽酮脱水缩合,天生糠醛衍生物。颜色的深  浅可直接定量测定纤维素含量。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、80%乙醇、丙酮、浓硫酸(不 容许快递) 、研钵和蒸馏水。

试剂的构成和配制:

试剂一: 液体 50mL× 1 瓶,4℃保管。

试剂二: 粉剂×1 瓶,4℃避光保管。

试剂三: 液体 10mL× 1 支,4℃保管。

尺度品: 粉剂10mg× 1支,4℃保管;  10mg 无水葡萄糖(枯燥失重<0.2%),临用前参加 1mL 蒸馏水消融,配制成 10mg/mL 葡萄糖溶液备用,4℃可保管 1 周,大概用饱和苯甲酸溶液消融, 可保管更永劫间。

样品的前处置:

1 、细胞壁的提取: 取约 0.3g 样本(计为M1),参加 1mL 80%乙醇,室温疾速匀浆,95℃水浴      20min ,冷却至室温,4000g 25℃离心 10min ,弃上清。沉淀参加 1.5mL80%乙醇和丙酮各洗一遍  (涡旋振荡 2min 左右,4000g 25℃离心 10min ,弃上清即可 沉淀即为粗细胞壁,参加 1mL  剂一(去除淀粉) 浸泡 15 小时,4000g 25℃离心 10min ,弃上清,1mL 80%乙醇洗濯两次,弃上 清,将沉淀枯燥,称重得细胞壁物质(CWM质量计为M2)。

2 、纤维素的提取: 称取烘干的 CWM  5mg(计为W),参加 0.5mL 蒸馏水充实匀浆,匀浆液转移  EP 管中,用蒸馏水定容至 0.5mL ,置于冰水浴中,迟缓参加 0.75mL 浓硫酸,混匀,冰水浴中 静置 30min 8000g 4℃离心 10min ,取上清液,用蒸馏水浓缩 20 倍后待测。

尺度溶液预备:

10mg/mL 葡萄糖尺度液举行二倍浓缩失掉 0.20. 10.050.0250.01250.006250.003125 0.00156mg/mL 尺度溶液备用。

测定步调:

1 、分光光度计预热 30min 以上,调治波长至 620nm ,蒸馏水调零。

 



本产品仅供迷信研讨利用! 请勿用于临床、诊断、餐饮、化装品检测等用处


2 、调治水浴锅至 95 度。

3 、事情液的配制: 在试剂二中参加 4mL 试剂三,充实消融,如较难消融,可加热搅拌;  不完的试剂 4℃保管一周;

4 、加样表(在 EP 管中反响 

 

试剂(μL

尺度管

测定管

样本


300

尺度品

300


事情液

70

70

浓硫酸

630

630

混匀,置 95度水浴中 10min(盖紧,以避免水疏散失 冷却至室温后,于 620nm 处读数。 纤维素含量盘算:

1 、尺度曲线绘制:

 0.2 0. 1 0.05 0.025 0.0125 0.00625 0.003125 0.00156mg/mL 葡萄糖尺度溶液为横坐

标,ΔA 为纵坐标绘制尺度曲线,失掉线性回归方程 y=kx+b ,将ΔA´代入方程失掉 xmg/mL);

2 、按细胞壁干重盘算

纤维素含量(mg/mg 鲜重)=x×浓缩倍数×V 提取÷W

3 、按总样实质量盘算

纤维素含量(mg/mg 鲜重)=x×浓缩倍数×V 提取÷W×M2÷M1

V 提取: 提取后体积,1.25mLW:样品格量,mg;浓缩倍数: 20M1:总样实质量,g M2:细胞壁物质CWM g

 

留意事变

1. 加热历程中有猛烈反响,震荡时轻摇,以免压力过大喷出形成人生损伤。

2. 浓硫酸具有强腐化性,发起戴防护手套操纵。

3. 如样本OD值大于1.5 ,可在纤维素提取历程中扩展浓缩倍数,计数历程中乘以对应的浓缩倍数

 

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