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小鼠仙台病毒(HVJ)ELISA检测试剂盒利用阐明书
点击次数:160 公布工夫:2022-11-15

本试剂盒只能用于迷信研讨,不得用于医学诊断

小鼠(Mouse)仙台病毒(HVJ)ELISA检测试剂盒

利用阐明书

检测原理

试剂盒接纳双抗一步夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)。往事后包被仙台病毒的包被微孔中,顺次参加标本HRP标志的检测抗体,颠末温育并彻底洗濯。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终极的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD 值),与CUTOFF值相比力,从而判断标本中仙台病毒(HVJ)的存在与否

样品搜集、处置及保管办法

1.  血清:利用不含热原和内毒素的试管,操纵历程中制止任何细胞安慰,搜集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞敏捷警惕地分散。

2.  血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  构造匀浆:将构造参加过量心理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保管:假如样本搜集后不实时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,制止重复冻融,在室温下冻结并确保样品匀称地充实冻结。

自备物品

1. 酶标仪(450nm)

2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

操纵留意事变

1.  试剂盒保管在2-8℃,利用前室温均衡20分钟。从冰箱取出的稀释洗濯液会有结晶,这属于正常征象,水浴加热使结晶完全消融后再利用。

2.  实行中不必的板条应立刻放回自封袋中,密封(高温枯燥)保管。

3.  预处置后的样本请依照操纵步调用样本浓缩液得当浓缩以到达试剂盒的的*佳检测结果

4.  严厉依照阐明书中标明的工夫、加液量及次序举行温育操纵。

5.  一切液体组分利用前充实摇匀。

试剂盒构成

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称号

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96孔设置装备摆设

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48孔设置装备摆设

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备注

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微孔酶标板

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12孔×8条

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12孔×4条

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阴性比较

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0.5mL

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0.5mL

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阳性比较

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0.5mL

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0.5mL

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检测抗-HRP

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10mL

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5mL

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20×洗濯缓冲液

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25mL

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15mL

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按阐明书举行浓缩

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样本浓缩液

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6mL

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3mL

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底物A

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6mL

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3mL

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底物B

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6mL

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3mL

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停止液

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6mL

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3mL

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封板膜

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2张

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2张

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阐明书

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1份

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1份

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自封袋

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1个

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1个

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试剂的预备

 20×洗濯缓冲液的浓缩:蒸馏水按1:20浓缩,即1份的20×洗濯缓冲液加19份的蒸馏水。

洗板办法

1.  手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗濯液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,云云洗板5次。

2.  主动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

操纵步调

1.  从室温均衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置阴、阳性比较孔和样本孔,阴、阳性比较孔中参加阴性比较、阳性比较各50μL;

3.  待测样本孔加待测样本10μL,再加样本浓缩液40μL

4.  随后阴、阳性比较孔和样本孔中每孔参加辣根过氧化物酶(HRP)标志的检测抗100μL,用封板膜封住反响孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗濯液,静置1min,甩去洗濯液,吸水纸上拍干,云云反复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6.  每孔参加底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.  每孔参加停止液50μL,15min内,在450nm波优点测定各孔的OD值。

后果判别

 1.  实验无效性:阳性比较孔OD值均匀值≥1.00;

                阴性比较孔OD值均匀值≤0.15。

2.  临界值(Cut off)盘算:临界值=阴性比较孔均匀值+0.15

3.  阴性判别:样品OD值<临界值(Cut off),样品为阴性

4.  阳性判别:样品OD值>临界值(Cut off),样品为阳性

试剂盒功能

1.  正确性:阳性比较孔OD值均匀值≥1.00;阴性比较孔OD值均匀值≤0.15,阐明实验后果无效。

2.  特异性:不与别的可溶性布局相似物交织反响。

3.  反复性:板内、板间变异系数均小于15%。

4.  贮藏:2-8℃,避光防潮保管。

5.  无效期:6个月

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实行代做办事:

 

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